色譜柱是液相色譜儀的重要組成部分,對液相色譜柱的正確使用不僅能延長色譜柱的使用壽命,還能有效保證實驗結(jié)果。
色譜柱正確及時的沖洗非常有必要:
1、加裝保護柱。保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾也可以有效除去”同時流動相中的不溶物。盡管液相色譜儀在流動相吸入口和進樣閥后部都裝有不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污然,加裝保護柱,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時*。
2、過濾流動相和樣品。流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時,色譜柱的流動相應(yīng)過濾。要注意區(qū)分水系和油系,二者不可混用。裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換。
3、凈化樣品。當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機分子和強吸附性物質(zhì)等,在進樣前應(yīng)盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
4、避免液相色譜柱過高的柱壓。雖然液相色譜柱能耐受的壓力大,但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,所以要注意避免過高的柱壓。
5、注意溫度和酸堿度。一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱zui高使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動相pH接近使用限度時,更應(yīng)降低使用溫度。溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質(zhì)改變,柱床塌陷,降低柱效改變峰形。若需要在的pH條件下使用時,可通過在泵和進樣閥之間加裝預(yù)柱或降低使用溫度的方法來避免液相色譜儀的色譜柱損害。
6、對液相色譜柱正確及時的沖洗。開始試驗前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶,如不能混溶要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡,使用時應(yīng)給予注意。